Le Retour de la mouche reprenant certains personnages du premier film (La Mouche noire, Kurt Neumann, 1958), il eut semblé logique que les acteurs soient les mêmes.
S'il n'en était bien évidemment pas question pour le rôle principal (le fils du savant du premier épisode étant entre-temps devenu adulte), c'est en revanche bien le cas de son oncle, François Delambre, incarné par Vincent Price dans les deux cas.
Il aurait dû en être de même pour l'inspecteur Charas, mais Herbert Marshall, qui jouait le rôle, était malade au moment du tournage. Il fut donc remplacé au pied levé par John Sutton, le personnage étant en conséquence renommé "inspecteur Beecham".
Quant à la femme du savant original, sans qu'on sache s'il s'agit d'une volonté affirmée du scénariste ou d'un choix de l'actrice, elle meurt au début du second opus.
Le Retour de la mouche est en fait la suite de La Mouche noire (Kurt Neumann, 1958). Mais, contrairement à ce dernier, cette suite ne connut pas de sortie en salle en France.
Elle fut elle-même suivie d'un troisième opus encore indisponible en France, Curse of the Fly (Don Sharps, 1965).