Ivano de Matteo a commencé sa carrière artistique en 1990 en fréquentant le laboratoire de théâtre Il Mulino di Fiora (Le moulin de Flore) dirigé par Perla Peragallo. En 1993, avec sa compagne Valentina Ferlan (auteur et scénariste venant de Trieste), il fonde la compagnie « Il Cantiere » (le chantier). Après différents rôles dans des films dans les années 1990, il fonde la société de production Utopia Film en 2005. C'est la télévision qui le rend connu auprès du grand public à la fin des années 2000, avec le rôle de « Er Puma » dans Romanzo criminale. Son film La bella gente obtient le Grand prix du Festival du film italien d'Annecy en 2009.