Après un diplôme en Art Dramatique obtenu en 1928, Katharine Hepburn commence une fructueuse carrière sur les planches. Elle débute au cinéma en 1932 dans Héritage, un succès, et signe un contrat avec la RKO. Dans la foulée, elle tourne cinq films pour la firme dont Morning glory qui lui vaut son premier Oscar. Sa carrière est lancée et sera exemplaire : douze nominations aux Oscars et quatre statuettes remportées pour ses interprétations dans Devine qui vient dîner ? (1967), Un lion en hiver (1968) et La Maison du lac (1981).
Femme de tête, indépendante, en avance sur son temps et à l'allure androgyne, elle impose sa forte personnalité dans ses choix. Elle se déguise en garçon dans Sylvia Scarlett, campe la reine d'Ecosse dans Mary Stuart ou incarne une jeune fille désirant s'élever socialement dans Alice Adams.
L'année 1942 marque sa rencontre avec Spencer Tracy, qui devient son partenaire à la ville comme à l'écran. Entre 1942 et 1967, ils tournent neuf films ensemble dont La Femme de l'année, L'Enjeu, Le Maître de la prairie ou encore Madame porte la culotte.
Dans les années 50, Katharine Hepburn tourne moins, mais travaille néanmoins pour John Huston et Joseph L. Mankiewicz, respectivement dans African Queen et Soudain l'été dernier. Durant les deux décennies suivantes, on la voit encore un peu au cinéma (Les Troyennes, Une Bible et un fusil) et aussi à la télévision, où elle apparaît surtout dans les années 90. Elle obtient son dernier rôle sur grand écran en 1994 dans Rendez-vous avec le destin.