D’abord déterminé à poursuivre une carrière dans le droit, Matt Czuchry suit ses premiers cours de théâtre à l’université et se voit encouragé par son professeur à poursuivre dans cette voie. Après avoir décroché son diplôme en histoire de l’art et en sciences politiques, il rejoint, en 2000, le casting de Young Americans aux côtés de Ian Somerhalder et Kate Bosworth. Il y incarne Sean McGrail, l’ami d’enfance de Will, le personnage principal de cette série annulée au terme de sa première saison. Il enchaîne ensuite les apparitions dans 7 à la maison ou encore Jake 2.0 avant d’obtenir un rôle dans la saison 2 de Le justicier de l'ombre, une série sur la police de Philadelphie. 

C’est Gilmore Girls, qu’il rejoint au cours de la saison 4, qui lui permet de gagner en reconnaissance auprès du public. Matt y incarne Logan Huntzberger, un jeune homme aisé qui va parvenir à conquérir le coeur du personnage joué par Alexis Bledel, un rôle qui reprendra en 2016 dans Gilmore Girls : Une nouvelle année, sur Netflix. Deux ans après la fin de la série, le comédien devient l’un des personnages principaux de The Good Wife. Durant 7 saisons, il prête ses traits à Cary Agos, un jeune avocat qui va très vite entrer en compétition avec Alicia Florrick (Julianna Margulies). 

En 2018, Matt Czuchry est choisi pour prêter ses traits au Dr Conrad Hawkins, un médecin talentueux mais quelque peu arrogant dans la nouvelle série médicale de la FOX The Resident. C’est l’occasion pour lui de faire face à Emily VanCamp et Manish Dayal, qu’il avait déjà croisé sur le plateau de The Good Wife.