Fred Testot fait ses débuts sur les ondes, d'abord sur Fun Radio, puis sur Radio Nova, où il rencontre son futur complice Omar Sy, avec qui il débutera sur Canal +, aux côtés de Jamel Debbouze. C'est en revanche en solitaire qu'il s'illustre sur grand écran, à l'affiche de Old school (1999). Mais seul, le comédien ne le reste pas longtemps puisque, outre les spectacles comiques qu'il monte avec Omar Sy, il retrouve ce dernier aux castings des courts métrages La Concierge est dans l'ascenseur et Ces Jours heureux, puis des longs Le Carton et Frère des ours, dans lequel Fred donne de la voix pour la première fois de sa carrière.
En 2005, on découvre pour la première fois les sketchs téléphoniques d'Omar Sy et de Fred Testot dans le SAV des émissions, diffusé tous les soirs dans le Grand Journal de Canal +. Leurs personnages deviennent cultes et la cote des deux comédiens grimpe rapidement.
Fred Testot réitère par la suite l'exercice de doublage dans la série Moot-Moot, puis dans Volt, star malgré lui, Les Lascars et Logorama, après être apparu dans Seuls Two, première réalisation d'Eric et Ramzy. Il livre une prestation remarquée pour son premier rôle principal aux côtés de Cécile de France dans le polar Gardiens de l'ordre de Nicolas Boukhrief, avant de retourner au doublage pour le film Allez raconte!, sur lequel il retrouve son complice Omar Sy.
En 2011, il est la tête d'affiche de deux comédies, Au bistro du coin et Itinéraire bis. Alors que dans la première, il est le gérant d'un bistro qui se transforme en lieu de spectacle pour une bonne cause, il est séduit dans la seconde par la belle Leïla Bekhti, qui lui en fait voir de toutes les couleurs. A la rentrée, c'est dans le remake de La Guerre des boutons qu'on retrouve Fred Testot, aux côtés de Mathilde Seigner et Eric Elmosnino, avant de le voir jouer les horticulteurs dans l'adaptation d'Alain Chabat de la BD du Marsupilami. Il joue ensuite dans le film de pote Dépression et des potes et la comédie estivale Sea, No Sex and Sun.
En 2013, Fred Testot prend part à l'adaptation contemporaine du célèbre conte Le Grand Méchant Loup puis joue de solides seconds rôles aux côtés de grands cinéastes comme Jean Becker (Bon rétablissement !), Jean-Pierre Mocky (Monsieur Cauchemar) ou Diane Kurys (Arrête ton cinéma !). On le voit aussi dans les comédies À deux heures de Paris et En passant pécho. Parallèlement, l'acteur s'illustre dans les séries La Mante, Le temps est assassin, Faites des gosses et Sam, ainsi que dans les téléfilms L'Epreuve d'amour, Intraitable et La Mort est dans le pré (lui permettant d'aborder des registres plus sombres).
En 2022, Fred retrouve Jean Becker pour Les Volets verts, un drame centré sur un acteur de théâtre au sommet, campé par Depardieu.