Inspiré par des parents très actifs au sein de leur théâtre local, Donald Adeosun Faison fait ses débuts dans le métier à l’âge de 5 ans dans des publicités télévisées. Des cours d’art dramatique lui permettent de perfectionner son jeu au fil des années. Fils de Loretta Devine dans la comédie romantique avec Whitney Houston Où sont les hommes ?, il est propulsé - adolescent - sous les feux des projecteurs grâce à Clueless, avec Alicia Silverstone en tête d’affiche. Il y incarne Murray, un étudiant populaire en couple avec la meilleure amie de Cher, Dionne (Stacey Dash). Rôle qu’il est amené à reprendre, en 1996, avec sa partenaire durant les trois saisons de la série éponyme portée par Rachel Blanchard.
La série terminée, Donald Faison se fait remarquer en donnant la réplique en 2000 à Denzel Washington dans Le plus beau des combats, troublant long métrage inspiré de faits réels montrant comment le sport peut devenir un facteur d'intégration raciale et d'insertion sociale. Dans la foulée, J.J. Abrams l’accueille dans son teen show, Felicity, dans lequel il est un temps fiancé à Elena (Tangi Miller). Sa carrière passe à l’étape supérieure lorsque Bill Lawrence le choisit pour interpréter le Dr Chris Turk, le meilleur ami de J.D. (Zach Braff), dans Scrubs. Si les jeunes internes deviennent au fil des épisodes des médecins chevronnés, la petite bande n’a de cesse de partager de folles aventures dans les couloirs de l'hôpital du Sacré Cœur. Le succès de la sitcom est immédiat et fait les beaux jours du network NBC durant pas moins de 9 saisons. Ce personnage très populaire va s’avérer très difficile à faire oublier.
La période post-Scrubs se révèle un peu compliquée. Après s’être glissé dans le costume du Dr Gravity pour le 2ème volet de Kick-Ass, Donald Faison est dirigé par son ex-partenaire et désormais ami Zach Braff dans le film Le rôle de ma vie. Il devient à nouveau régulier dans la série The Exes, avec Kristen Johnston et Wayne Knight. Phil Chase, son personnage, partage un appartement avec d’autres divorcés. Ensemble, ils redécouvrent le célibat. La sitcom restera quatre saisons à l’antenne sur le câble américain.
En grand fan de Star Wars, Donald Faison jubile lorsque – après avoir fait du doublage pour les programmes d’animation Clone High, SuperMansion ou Robot Chicken – il est sélectionné pour prêter sa voix sur Star Wars: Resistance, puis Star Wars: Detours. A partir de l’automne 2019, l’acteur est au générique du nouveau drama fantastique d’ABC, Emergence. Il y interprète Alex Evans, toujours impliqué dans la vie de Jo (Allison Tolman), son ex-épouse et héroïne de la série.