Né de l’union de Robyn et du docteur Rodney Spencer, le jeune Jesse est le troisième de leurs quatre enfants. Dès son plus jeune âge, il apprend à jouer du violon et nourrit une passion pour la comédie. Ainsi, à 12 ans, il participe à sa première comédie musicale "Anna et le Roi", où il campe le personnage de Louis. L’année suivante, il retrouve les planches pour donner corps à Christopher Robin dans la pièce de théâtre "Winnie l’ourson". Puis, en 1993, il se produit au Princess Theater de Melbourne pour "Scrooge". Scolarisé dans un établissement privé, Jesse Spencer passe les auditions pour intégrer en 1994 le soap australien Neighbours. Il obtient le rôle de Billy Kennedy. Pour autant, il poursuit ses études considérant alors le métier d’acteur comme un passe-temps. De plus, à l’instar de ses frères et sœur, il souhaite se diriger vers des études ...
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